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前言
由于B群鏈球菌（Group B Streptococcus,
Streptococcus agalactiae, GBS，乙型鏈球 菌）可引起新生兒的肺炎(pneumonia)、腦膜
炎(meningitis)和敗血癥(sepsis)以及產(chǎn)婦敗血
癥及肺炎（圖1）[1, 2]，美國疾病控制與預(yù)防 中心(Centers for Disease Control and Prevention, CDC)建議懷孕35~37周之婦女需進(jìn)行陰道
及/或肛門拭子的 GBS 檢測，以期在分娩前
施與抗生素。此措施成功地降低新生兒GBS 感染率達(dá)75%以上，也使致死率由1970年的 50%大幅下降至1990年的5% [3]。在臺灣， 衛(wèi)生福利部國民健康署也為了提升產(chǎn)前GBS 檢查的普及率，于2014年 4 月起將 GBS 檢
測費納入健保給付[4]根據(jù)美國CDC建議以及衛(wèi)福部國健署委 托臺灣醫(yī)事檢驗學(xué)會擬定的偵測B 群鏈球菌 標(biāo)準(zhǔn)作業(yè)流程[3, 5]（圖2），建議以無菌棉拭 自陰道及/或直腸采檢后插入嗜氧檢體運送管 (aerobic transport medium)，送到檢驗室后，先劃種血瓊脂平板(BAP)，再將棉拭插入Lim broth（純增菌用）或carrot broth（增菌與鑒 別用），在35℃一般恒溫箱培養(yǎng)18~24小時 后，若 BAP 上有疑似 GBS 的 -溶血型菌落
則需進(jìn)行CAMP (Christie, Atkins, and MunchPetersen)、hippurate（馬尿酸）水解或鏈球 菌分群試驗加以確認(rèn)，如無發(fā)現(xiàn)疑似菌落， 則再將 Lim broth 增菌液再次移種一血瓊脂 平板，所有培養(yǎng)基均繼續(xù)培養(yǎng)18~24小時， 再發(fā)出最終報告。若接種carrot broth，則檢 視其是否顯色，若呈胡蘿卜色即可報告為GBS 陽性，若呈陰性，則再接種 GBS DetectTM （Hardy公司，美國），若有 -溶血型菌落， 則需如同Lim broth所移種BAP上的疑似菌 落進(jìn)行確認(rèn)試驗，如無發(fā)現(xiàn)疑似菌落，則所 有培養(yǎng)基均繼續(xù)培養(yǎng)18~24小時，再發(fā)出最
終報告。
雖然美國CDC及衛(wèi)福部國健署的建議流 程可將 GBS 的檢驗標(biāo)準(zhǔn)化，但所用的 Lim broth增菌培養(yǎng)基方法需經(jīng)過多次移種培養(yǎng)確
認(rèn)，將會延遲報告3~4天[6]，而carrot broth 的接種需加一條促進(jìn)產(chǎn)色紙條[7]，以及所建 議移種的 GBS DetectTM 偽陽性高達(dá)58% (62/107) [8]，造成檢驗人員的不便以及鑒定
人力與物力的浪費。由于使用嗜氧檢體運送 管運送檢體不能立即增菌，并可能讓產(chǎn)道或 腸道棲息菌增生進(jìn)而干擾GBS的檢出。有鑒
于上述美國CDC及衛(wèi)福部國健署建議方法的 諸多缺點，啟新生物科技有限公司（新北市， 臺灣）遂設(shè)計孕婦產(chǎn)前檢查B 群鏈球菌的簡 易高效快檢套組，其系由運送裝置 CMPTM GBS
TransCultSwab（GBS 的運送增菌培養(yǎng) 管）[9]結(jié)合 / GBS detection agar（偵測瓊 脂）[10] / GBS
carrot agar（GBS 胡蘿卜瓊脂）[11]分隔平板(Bi-plate)而組成，此套組以 簡易操作、高檢出率（分離率）及可縮短報 告時間與減少檢驗人員操作人力做為要求。 本研究將評估 GBS TransCultSwab 結(jié)合 / GBS detection agar /
GBS carrot agar分隔平 板的移種以確認(rèn)其在臨床實際應(yīng)用的有效性。
材料與方法 :
GBS檢驗套組的組成 GBS 簡易高效快檢套組的組成包括 CMPTM GBS TransCultSwab[9]與 / GBS detection
agar[10] / GBS carrot agar[11]分隔平板，每一個孕婦使用一支GBS
TransCultSwab 及一個分隔平板，分別介紹如下： GBS TransCultSwab（圖3A）：GBS TransCultSwab（專利證書I627277號）是一 種結(jié)合采檢、運送、增菌與GBS假設(shè)性鑒定 四種功能的裝置，包裝中含有一支塑料管，
內(nèi)含可讓 GBS 增菌與實時抑制其它產(chǎn)道/直 腸棲息菌生長的培養(yǎng)基配方，以及使GBS的 -溶血株生長后顯色的成份，以半固體的方式 配制以利運送；裝置中另附一支無菌棉拭作
為采集產(chǎn)道及/或直腸分泌物檢體之用。醫(yī)師 采檢時將棉拭取出插入產(chǎn)道及（或）直腸約 2~3公分處旋轉(zhuǎn)兩圈采取足量分泌物后插至 含增菌培養(yǎng)基的塑料管中，在室溫或35℃恒
溫箱暫時保存，然后在最短的時間內(nèi)送至微 生物檢驗室，檢驗室收到此運送裝置，登記 相關(guān)數(shù)據(jù)后，置于35℃的一般或 CO2 恒溫 箱，培養(yǎng)5~24小時后可在任何時間內(nèi)取出棉 拭移種至套組的分隔平板。 / GBS detection agar / GBS carrot agar 分隔平板：分隔平板中的 GBS carrot agar（專利證書I627277號）系針對GBS 溶血型菌株的偵測而設(shè)計的固體培養(yǎng)基，GBS carrot agar 含有特殊顯色基元可讓 -溶血型 GBS 的生長菌落呈胡蘿卜色（圖3B 的右半 邊，呈米白色）， / GBS detection agar（專
利證書I561634號）系針對GBS -溶血型菌 株的偵測而設(shè)計。含有綿羊血與特殊的溶血
加強液，可讓 -溶血型菌落轉(zhuǎn)變成 -溶血型 （圖3C的左半邊，呈紅色），而其接種方法 （圖3 之操作流程）為取出 GBS Trans CultSwab 的棉拭劃種分隔平板的兩邊各約 1/3，然后利用接種環(huán)操作三區(qū)劃線技術(shù)，最
后在分隔平板的第一區(qū)培養(yǎng)基各插種5~7次， 接著放在35℃的一般或CO2恒溫箱培養(yǎng)20~48 小時。由于其它少數(shù)菌在 / GBS detection agar 的生長菌落亦同樣地呈 -溶血，因此，
培養(yǎng)后任何懷疑的生長菌落需再進(jìn)行適當(dāng)?shù)蔫b定試驗（如CAMP試驗、馬尿酸試驗或血 清分群試驗）加以確認(rèn)。
以臨床檢體實際評估GBS簡易高效快檢套組 從 2016年 4 月 1 日至2017年 3 月 31日 止，新北市某醫(yī)事檢驗所以CMPTM GBSTrans CultSwab 采檢744個產(chǎn)前 GBS 檢查檢體， 采集依產(chǎn)科門診的作業(yè)習(xí)慣暫時保存在室溫 或 35℃的一般或5 % CO 2 恒溫箱，再以常溫 方式運送至微生物檢驗室，放入35℃的一般
或 5% CO2 恒溫箱培養(yǎng)5~24小時。若中午前 收到檢體，則培養(yǎng)后在下班前一小時移種至
含 / GBS detection agar / GBS carrot agar 的分隔平板；若在中午后收到檢體，則培養(yǎng)
至次日早上移種。移種的方式如上述的分隔 平板使用說明。接著，將GBS TransCultSwab 與分隔平板培養(yǎng)置入35℃的一般或CO2 恒溫 箱培養(yǎng)20~48 小時，然后進(jìn)行判讀，若在 GBS carrot agar的生長菌落呈橘～紅色，且 在 / GBS detection agar呈現(xiàn) -溶血現(xiàn)象即 可鑒定為GBS（圖3B及表1），又若在GBS carrot agar的生長菌落不呈色，但在 / GBS detection
agar 呈現(xiàn) -溶血現(xiàn)象（圖3C 及表 1），則必須操作必要的鑒定試驗（如CAMP 試驗、馬尿酸試驗或血清分群試驗）加以確
認(rèn)。
GBS 簡易、高效及快檢技術(shù)所用套組與傳統(tǒng) 檢驗方法的成本與效能比較 以操作100個產(chǎn)前GBS檢查檢體為例， 假設(shè) GBS 陽性率為20%，將所評估的 GBS 簡易高效快檢套組與當(dāng)前傳統(tǒng)檢驗方法進(jìn)行 成本、操作方式、效能等比較。
結(jié)果 以臨床檢體實際評估GBS簡易高效快檢套組 利用 GBS 簡易高效快檢套組（結(jié)合 CMPTM GBS TransCultSwab與 / GBS detection
agar / GBS carrot agar 分隔平板）在12個月 間共評估744 個臨床產(chǎn)前檢查檢體，結(jié)果發(fā) 現(xiàn)孕婦的 GBS 檢出率(陽性率)為 24.32%
(181/744)，月的檢出率約介于18.60%~33.33%。 （表2）
GBS 簡易、高效及快檢套組與公告的傳統(tǒng)檢 驗方法、成本與效能比較 以操作100個產(chǎn)前 GBS 檢查檢體為例，假設(shè)GBS陽性率為20%，將GBS簡易、高效 快檢套組與公告的傳統(tǒng)的 GBS 檢測方法進(jìn)行 成本與效能比較，傳統(tǒng)檢測方法為利用嗜氧 運送管采檢及運送，送至檢驗室后接種血平 板或顯色平板(CHROMagar StrepB)以及Lim broth或carrot broth，培養(yǎng)后進(jìn)行判讀，結(jié)果 顯示 GBS 簡易高效快檢套組在操作時間、檢
出率、報告時效、成本以及簡易性等項目皆 優(yōu)于公告的傳統(tǒng)GBS檢測方法。（表3）。
討論
GBS 的孕婦帶原者約為15~30%[12-17]，
醫(yī)師對帶原者常用的預(yù)防用藥為 penicillin [3]，其施用時機為分娩前4 小時，但若孕婦 對其過敏，則檢驗室需提供其它適當(dāng)藥物的 藥敏型式。又如果發(fā)生早產(chǎn)，羊水提早破裂， 胎兒很可能因此受到感染。因此在孕婦產(chǎn)前 GBS檢查的正確性與快速性對預(yù)防性抗生素 的應(yīng)用將具有重要性。 傳統(tǒng)孕婦產(chǎn)前GBS檢驗方法為采檢后送
至檢驗室立即接種BAP或其它選擇區(qū)分性顯 色瓊脂（如CHROMagar
StrepB），然而兩 者 GBS 檢出率不高，僅為7.5%[18]以及 9.7~11.8%[19]，且BAP 與顯色平板生長菌落 對 GBS 均不具有特異性，前者為滋養(yǎng)培養(yǎng) 基，革蘭氏陽性及陰性菌都可以生長，而后 者有許多其它菌如Streptococcus pneumoniae Streptococcus pyogenes (GAS)、Group G Streptococcus (GGS)、Staphylococcus
aureus、 S. epidermidis與Stenotrophomonas
maltophilia 的生長菌落也呈現(xiàn)與GBS同樣的紫色菌落形態(tài)，而無法彼此區(qū)分，CHROMagar StrepB 顯色瓊脂的特異性僅達(dá)70% (24/40)[11]，此
發(fā)現(xiàn)與CHROMagar StrepB顯色瓊脂的使用 說明一致[20]。因此，在實際應(yīng)用時，任何紫
色菌落在CHROMagar StrepB的出現(xiàn)還需進(jìn) 行 CAMP 或 hippurate 水解等鑒定試驗以確 認(rèn)分離菌為GBS，此額外試驗將延遲檢驗報
告 1 天，也更浪費人力及物力。另外，林等 [21]以 PCR DNA方法檢測晚孕期陰道B 群鏈 球菌的定植分別發(fā)現(xiàn)其檢出率為14.1% (288/1,472)，而楊等[22]及季等[23]應(yīng)用實時螢 光定量PCR技術(shù)指出GBS的陽性率為13.5% (85/600)與 4.17% (377/9,073)。分子診斷技
術(shù)雖然快速獲得檢測結(jié)果，但檢出率不高， 且萃取檢體中的菌體DNA，不僅費時、成本 高、須有昂貴的設(shè)備與良好的實驗室環(huán)境以
及勝任的操作人員，且無法實時獲得進(jìn)行藥 敏試驗所需的GBS生長菌落，美國的疾病管 制署(CDC)[3]并不建議使用分子檢測方法直 接從孕婦產(chǎn)前檢體偵測GBS。 本研究指出GBS簡易、高效快檢套組證 實 CMPTM GBS TransCultSwab具有采檢/運送/增菌及假設(shè)性鑒定 GBS 的效能，檢驗人
員的使用將不需再移種增菌培養(yǎng)基(Lim broth 或carrot
broth)，也不需如同美國Hardy生產(chǎn) 的carrot
broth需額外插入加強顯色紙條，因 此 GBS TransCultSwab的操作堪稱簡易、方 便與親民(user friendly)。另外，GBS Trans CultSwab移種的分隔平板中GBS carrot agar 偵測 -溶血型GBS的特異性高達(dá)100%[11]， 因此，任何橘~紅色的生長菌落可借著顯色特征快速檢出GBS。GBS除了 -溶血型外， 尚有3~5%屬于非( )溶血型[3]，此可藉者分 隔平板的 / GBS detection agar快速偵測， 因此，檢測套組對GBS的偵測是全面性的， 雖然美國Hardy Diagnostics已研發(fā)可用于偵 測 溶血型GBS的區(qū)分性培養(yǎng)基-GBS DetectTM （平板培養(yǎng)基），發(fā)現(xiàn) 溶血型 GBS 從孕婦 檢體的檢出率為3.9% (24/619)，但因其偽陽 性高達(dá)58% (62/107)[8]，將導(dǎo)致檢驗人力的浪費及偽陽性的產(chǎn)生，綜合以上及本研究之
臨床744件檢體測試結(jié)果，使用 GBS Trans CultSwab搭配 / GBS detection agar / GBS carrot agar 分隔平板的移種，對GBS偵測率 （檢出率）高達(dá)24.32%。（表2） 過去研究曾指出Enterococcus spp.（腸 球菌）的菌量高于 -溶血型GBS十倍時會干 擾（掩蓋或抑制） -GBS在 GBS carrot agar [11]和GBS TransCultSwab的顯色能力[24-26]。 推測Enterococcus spp.干擾 -GBS的原因可 能為其等同屬一個菌科，生長條件相同，且
在增菌培養(yǎng)基的生長速度相近之故，但在相 等菌量存在時則不影響顯色。目前尚無法從 配方的改變加以改善，但運送管增菌培養(yǎng)5 小時后，搭配 / GBS detection agar / GBS carrot agar的三區(qū)劃線法移種，將可隔離GBS 與 Enterococcus spp.，而避免后者的干擾 [25]， -GBS雖然在carrot
agar不顯色，但可 在 / GBS detection agar產(chǎn)生 -溶血型菌落， 只要進(jìn)行必要的 CAMP、馬尿酸(hippurate) 水解或鏈球菌血清分群試驗將可立即加以區(qū) 分[10]。
孕婦產(chǎn)前檢查GBS分離率受到各種因素 影響[12]，包括(i) 醫(yī)師或護(hù)理師的采檢技術(shù)： 此因素影響GBS分離率最大，如果僅采集產(chǎn)
道，應(yīng)該將棉拭深入產(chǎn)道內(nèi)2 公分，慢慢旋 轉(zhuǎn) 2 圈已得到最大量的分泌物為原則；如果
用同一支棉拭采檢直腸部位檢體，也是操作 同樣的采檢技術(shù)。有些醫(yī)師欲分別得到產(chǎn)道 與直腸的檢體，則共取2 支無菌棉拭采檢。 (ii) 特殊增菌與分離培養(yǎng)基的使用：GBS 的 棉拭檢體不能直接接種平板培養(yǎng)基，必須先
經(jīng)過增菌，才能移種或操作real-time PCR。 增菌肉湯培養(yǎng)基包括carrot
broth, Lim broth, Trans-Vag broth 以及本研究所建議的 GBS
TransCultSwab，分離培養(yǎng)基則包括CHROMagar StrepB、BAP、CNA、PEA、GBS DetectTM以 及本研究所建議含 / GBS detection agar/
GBSCarrot agar的bi-plate，其中GBS
DetectTM、 bi-plate 與 CHROMagar
StrepB 均能測出 GBS，但因兩者偽陽性高，因此均需要挑取 GBS懷疑菌落進(jìn)一步操作確認(rèn)試驗（如CAMP 試驗）。(iii) GBS檢測的操作技術(shù)以及檢驗 人員的訓(xùn)練與經(jīng)驗：如果直接將棉拭檢體接 種 BAP 等分離培養(yǎng)基或操作 PCR 等分生技 術(shù)，GBS分離率僅約7~10%左右；如果僅用 GBS TransCultSwab 的培養(yǎng)結(jié)果，在醫(yī)師正
確采檢技術(shù)及檢驗人員對判讀有6 個月以上 經(jīng)驗的條件下，GBS分離率為18.63% (30/161) [9]以及18.28%[21]，如果沒有足夠的判讀經(jīng)
驗，分離率約為11.03%[21]，因此，GBSTrans CultSwab 應(yīng)該配合 / GBS detection agar/ GBS Carrot agar的 bi-plate的移種才能夠達(dá) 到本研究所顯示的高GBS分離率(24.32%)。 (iv) / GBS detection agar/ GBS
Carrot agar 的bi-plate接種技術(shù)：由于是分隔培養(yǎng)基，因 此選用三區(qū)劃線技術(shù)，移種的第一區(qū)約占表
面積的1/3，然后將接種環(huán)滅菌冷卻后再涂畫 第二區(qū)，同樣地，再次將滅菌環(huán)滅菌后再涂 畫第三區(qū)，最后在第一區(qū)插種5 次，以便獲 得無氧環(huán)境，更利于 -GBS 在 bi-plate 分別 產(chǎn)生橘-紅色[11]及產(chǎn)生 -溶血環(huán)。(v) 棉拭檢 體需有足夠的增菌時間：無論在carrot broth, Lim broth, Trans-Vag broth 以及GBS
Trans CultSwab均需要培養(yǎng)在35~37℃的CO2 培養(yǎng)
箱，肉湯培養(yǎng)基須培養(yǎng)20~24小時，而GBS TransCultSwab則培養(yǎng)5~24小時，才能移種 至CHROMagar StrepB、BAP、CNA、PEA、 GBS DetectTM 之一的分離培養(yǎng)基。以及(vi) 延長培養(yǎng)時間及再次移種：GBS 檢測的棉拭 檢體經(jīng)過增菌、移種及培養(yǎng)后如果沒有顯示 生長，增菌培養(yǎng)基最好延長培養(yǎng)一天，然后 再進(jìn)行平板培養(yǎng)基的移種及培養(yǎng)后的觀察。
總之，除了提高GBS的檢出率、有能力 偵測 -溶血型 GBS 以及避免 Enterococcus spp.的干擾外，本研究亦發(fā)現(xiàn)此套組的分隔平板在培養(yǎng)隔日即可鑒定出GBS，其陽性生 長菌落可隨即用于操作藥敏試驗，如此，將 可縮短至少一天的報告時間，并且GBS
Trans CultSwab 運送管與 GBS carrot agar 上的顯 色及在 / GBS detection agar呈現(xiàn)的 -溶血 特征將可做為三重復(fù)確認(rèn)(triple-check) GBS 的存在，由于檢驗人員僅需移種一次，且花 費時間僅約15秒，對檢驗人員堪稱方便，操
作人員僅需稍微訓(xùn)練即能進(jìn)行檢驗工作，因 此，對臨床檢驗室而言，GBS TransCultSwab 結(jié)合 / GBS detection agar / GBS carrot agar 的移種將具備簡易、快速及高通量(highthroughput)檢測的優(yōu)點，值得臨床檢驗室加 以應(yīng)用，以便將陽性檢驗結(jié)果實時提供醫(yī)師 做為預(yù)防新生兒與孕婦感染的參考。
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